真菌二肽基肽酶10 DPPⅩ ELISA试剂盒操作方法简介如下:
1. 试剂准备:使用前,将试剂盒从冷藏环境中取出,在室温下平衡15-30分钟。检查试剂盒内各组分是否齐全,如有结晶析出,可将浓缩洗涤液在水浴中加温助溶,稀释后使用。
2. 样本处理:根据样本类型(如血清、血浆、组织匀浆等)进行相应处理。血清和血浆样本需离心分离上清液,避免溶血和高血脂样本;组织匀浆需用预冷的PBS冲洗组织,称重后剪碎并匀浆,离心取上清。样本采集后应尽早提取并检测,若不能及时检测,需分装冻存于-20℃,避免反复冻融。
3. 加样与温育:设置标准品孔和样本孔,按要求加入标准品和样本。使用加样器准确加样,避免气泡产生。加样后,用封板膜封住反应孔,置于37℃恒温箱中温育适当时间。
4. 洗涤与显色:温育结束后,弃去液体,用洗涤液充分洗涤反应孔,拍干。然后加入底物A、B液,避光孵育显色。
5. 终止与测定:显色完成后,加入终止液终止反应。在15分钟内,用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度(OD值)。
6. 结果计算:以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线。根据样品OD值,由标准曲线查出相应浓度,或代入标准曲线方程计算样品浓度,再乘以稀释倍数得到实际浓度。
操作过程中需严格遵守说明书要求,避免交叉污染,确保实验结果的准确性。