人对氧磷酶(Paraoxonase, PON)是一类与脂质代谢及抗氧化能力密切相关的蛋白质,其在血清中的含量常被用于相关研究。高灵敏度人对氧磷酶ELISA试剂盒采用经典的双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA),为科研提供了一种稳定、可重复的定量检测手段。
该试剂盒的核心原理基于抗原-抗体的特异性结合。
首先,微孔板预先包被有针对人PON蛋白的捕获抗体。当加入待测样本(如血清或血浆)后,样本中的人PON会与包被抗体结合并固定于孔底。
随后,加入生物素标记的检测抗体,该抗体能识别PON分子上的另一表位,从而形成“捕获抗体—PON—检测抗体”的三明治复合物。
接着,加入酶标记的链霉亲和素,其与生物素牢固结合,使酶分子间接连接到复合物上。
最后,加入显色底物,在酶的催化作用下产生颜色反应,颜色深浅与样本中PON的含量成正比。通过酶标仪测定特定波长下的吸光度值,并依据标准品绘制的标准曲线,即可计算出各样本中PON的浓度。
整个检测流程通常包括样本准备、加样、孵育、洗涤、显色和读数等步骤,操作规范、条件统一是获得可靠数据的关键。该方法具有良好的特异性和重复性,适用于批量样本的定量分析,为相关领域的基础研究提供了有力工具。